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提供商:          上海研謹(jǐn)生物
服務(wù)名稱:        核仁組成區(qū)嗜銀-AGNOR染色
規(guī)格:            樣本
價(jià)格：          60元
收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)/服務(wù)周期/提供結(jié)果:
歡迎咨詢?cè)斦劊覀儠?huì)根據(jù)您的方案及需求制定詳細(xì)的服務(wù)協(xié)議。
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核仁組成區(qū)嗜銀-AGNOR染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)
 
一.核仁組成區(qū)嗜銀(AGNOR)染色簡(jiǎn)介
核仁組成區(qū)(NORs)是染色體上的一個(gè)編碼核糖體RNA(rRNA)的片段，存在于DNA特異性環(huán)上，凸向核仁。在電鏡下，核仁組成區(qū)為在電子致密區(qū)中的境界不清的淺染區(qū)域。在石蠟切片上,在核仁中見到的每一個(gè)點(diǎn)狀反應(yīng)顆粒有可能代表多 個(gè)AgNOR位點(diǎn)。核仁組成區(qū)嗜銀蛋白染色主要特點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便、批量染色的較為經(jīng)濟(jì), AgNOR位點(diǎn)的數(shù)量增加與細(xì)胞增殖性增加有關(guān)，對(duì)于良惡性腫瘤的鑒別具有一定的意義。
二、試劑配制
1. AgNOR染色液
甲液:明膠2 g溶于雙蒸水至99 ml,在60°C使之完全溶解，再加入純甲酸1 ml搖勻待用。
乙液: AgNO350 g溶解于雙蒸水中至100 ml, 4°C冰箱保存。
2. AgNOR工作液
取甲液10 ml,乙液20 ml臨用前混合。
三、染色步驟
1.切片脫蠟至水
2.雙蒸水洗2次
3.AgNOR工作液中(25°C) 浸染30分鐘(暗處進(jìn)行) (鏡下觀察)
4.脫水，透明，封固
5結(jié)果:油鏡觀察，細(xì)胞核及胞質(zhì)背暴為淡黃色，AgNOR呈棕黑色顆粒狀。
四、樣本說明
1、 石蠟切片
取材: 1.組織離體后需及時(shí)固定; 2.組織標(biāo)本不宜過大、過厚。
固定: 1.固定液: 10%福爾馬林(4%Paraformaldehyde) 或10%中性甲醛: 2.用量: -般固定液的量與組織體積比為
10:1~20:1; 3. 固定:適宜的固定時(shí)間，主要根據(jù)材料的大小松密程度及固定液的穿透速度而定。
保存:切片經(jīng)60°C烤片3-5小時(shí)后，可于常溫或4°C干燥保存。
2.冰凍切片
取材:取材后需立即置于超低溫冰箱或液氮中保存。
固定:樣本冰凍切片后，應(yīng)立即放入甲醇、acetone. 95%酒精、 4%Paraformaldehyde等固定液中固定。
保存:固定好的切片自然風(fēng)干，密封后置于-80°C. -20°C保存， 盡快用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
3.細(xì)胞塊石蠟切片
細(xì)胞量較多的樣品，可離心分離所需細(xì)胞，用中性甲醛固定后制作成瓊脂細(xì)胞塊，然后按照制作石蠟切片的操作流程進(jìn)行切
片。
4、細(xì)胞爬片
在孔板里做的細(xì)胞爬片，爬片取出后，用PBS洗滌2次(根據(jù)研究目的，PBS洗滌可選擇不做)。用4%Paraformaldehyde49C固定15分鐘，將表面液體吹干，置于-20°C保存。若在短時(shí)間內(nèi)即開展實(shí)驗(yàn),可在加固定液后，于4°C冰箱中放置一段時(shí)間。
5.細(xì)胞涂片細(xì)胞涂片常用的固定液有95%酒精(為常用)、酒精 Glacial acetic acid solution. Ethyl ether-酒精液和
Carney's液等。
五、注意事項(xiàng)
1.常用的固定液為中性甲醛和4%Paraformaldehyde, 能使大多數(shù)抗原保存良好，適用于免疫組織化學(xué)。
2.病理實(shí)驗(yàn)切片好是防脫片，以免實(shí)驗(yàn)過程中出現(xiàn)掉片。若客戶提供切片，應(yīng)告知切片有無防脫處理。
3.骨組織、皮膚組織或脂肪含量較高的樣本,實(shí)驗(yàn)過程中有較高的掉片幾率。
4.客戶可提供組織塊(以10%福爾馬林、4%Paraformaldehyde或10%中性甲醛固定， 如組織塊極小請(qǐng)事先說明) . 蠟塊
或切片(使用免疫組化專用切片，以避免實(shí)驗(yàn)過程中掉片)
5.待檢測(cè)蛋白的種屬、實(shí)驗(yàn)分組情況及實(shí)驗(yàn)背景資料、其他具體要求等需事先說明。
6.若客戶提供骨組織或鈣化程度較高的組織進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，需進(jìn)行脫鈣處理。
7.浸泡在固定液中的組織樣本，在運(yùn)輸中容器需密封，防止破碎、滲漏。
從2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)外包及論文潤(rùn)色服務(wù)，協(xié)助客戶各類實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤(rùn)色，是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!
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