勞克堅牢藍(LFB)屬于銅-酞箐染料,在酒精溶液中具有與髓鞘磷脂結(jié)合的染色特性。應(yīng)用LFB髓鞘染色可以很好地顯示出神經(jīng)組織的髓鞘結(jié)構(gòu)。
LFB髓鞘染色實驗意義:
LFB染色觀察染色陽性纖維的深淺和多少，還可用來定量分析脫髓鞘病變及髓鞘再生等有關(guān)髓鞘改變情況。
實驗步驟:
(1)石蠟切片脫蠟至水:依次將切片放入二甲苯I 20min-二甲苯I 20min-無水乙醇I 10min-無水乙醇I 10min-95%酒精5min-90%酒精5min-80%酒精5min- 70%酒精5min蒸餾水洗。
(2) 染色:切片置于0.1% LFB染液60°C孵育過夜， 自來水沖洗。
(3)分化:切片放入70%乙醇中(無固定時間) ;切片浸入0.05%碳酸鋰中,鏡下控制分色時間至分色完全(可見灰質(zhì)部分顏色變淡) ;如分化不好這兩步交替進行幾次至鏡檢滿意,水洗。
(4)伊紅復(fù)染: 0.1%伊紅復(fù)染1min,水洗。
(5)封片:電吹風(fēng)吹干或烘箱吹干;二甲苯逶明數(shù)分鐘，中性樹膠封片。
(6)顯微鏡鏡檢，圖像采集分析。
實驗結(jié)果:
經(jīng)髓鞘呈藍色;其他成分呈紅色。
實驗技巧:
(1) 切片若為石蠟切片，要在二甲苯中先脫蠟，再至無水乙醇。
(2) 0.05%碳酸鋰水溶液分色應(yīng)該在顯微鏡下進行，至背景呈灰色為止。70%酒精再次分色時，至背景無色為止。
(3) LFB染色完后， 可用焦油紫溶液或蘇木素-伊紅復(fù)染，這樣能更好地顯示出細胞的形態(tài)。
(4) 復(fù)染之后要入正丁醇漂洗脫水，這樣染色效果更佳。
(5) 溶液配制:勞克堅牢藍1g, 95%酒精100ml, 10%冰醋酸0.5ml。 混勻后過濾，室溫保存。
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