bEnd.3 小鼠腦微血管內皮細胞
Catalogue No.: C397
Product Format: a T25 flask
Culture Properties：貼壁
Complete Growth Medium: 89%H-DMEM+10%FBS+1%雙抗
Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
Application:  Cells and cancer research
NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.
 
Components  

Item	Specifications
a T25 flask	2X106
Manual	1 copy

 
Operation steps for cell culture
1. 吸走多余培養基，加入3-5mL PBS后輕輕晃動培養瓶潤洗細胞；
2. 吸干凈PBS后加入1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA，輕輕搖晃培養皿使胰酶浸沒細胞表面，培養瓶放37度培養箱消化；
（細胞對于消化比較敏感，消化過度會嚴重影響細胞狀態，導致細胞傳代死亡漂浮或者傳代后不長。細胞消化到細胞間隙變大但未脫落，可以輕輕吹下時即可終止，禁止消化到細胞完全漂浮。混勻細胞時盡量輕柔，不要吹出大量氣泡。）
3. 加入6-8ml完全培養基終止消化，輕輕吹下細胞混勻；
4. 將混勻的細胞1000rpm（約150g）離心3min，棄上清，再用新鮮培養基重懸37度培養箱繼續培養；
傳代比例: 不同細胞生長速度不一，具體傳代比例視細胞生長速度而定，大部分細胞適用1:3-1:4傳代，生長較慢的細胞可以1:2傳代。
Cell cryopreservation
1.凍存液：92%完全培養基+8%DMSO（可以根據實驗室條件自行選擇）
2.降溫步驟：4度10min，-20度2h，-80過夜后液氮保存。

Tips：
1. 細胞經過運輸后，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常現象。貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900-1000rpm(約150g)離心3min，棄上清。加5ml PBS重懸細胞，再900-1000rpm(約150g)離心3min，用新鮮的完全培養基重懸接種到新的培養瓶。第二次PBS重懸是為了去除碎片，如果平時碎片比較少，傳代時可以省略PBS重懸的步驟；如果碎片很多，建議PBS多洗幾次。
2. 細胞生長不均時，可以將細胞消化吹散后加入新的培養基重新接種或傳代。
3. 細胞生長緩慢時，可以選擇提高血清濃度培養（最高不超過20%），也可以根據細胞生長狀態，選擇傳代細胞到新的培養瓶中繼續培養。
4. 不同細胞貼壁性差異比較大，所以消化時間差別較大，20s-10min均有可能，具體以細胞消化到相互分離但未脫落，并可以輕輕吹下為準，嚴禁消化到細胞完全漂浮。客戶消化過度導致細胞死亡、漂浮、生長緩慢，不提供免費售后服務。
5. 干冰發貨均為兩支，客戶先復蘇一支，若復蘇失敗及時聯系我方并在我方指導下復蘇第二支。若客戶同時復蘇兩支均狀態不佳，我方不提供免費售后服務。
6. 細胞狀態正常時，應盡快凍存細胞保種，凍存后應隨機抽取一支檢測凍存效果。我方不對客戶凍存細胞導致死亡負責，客戶凍存細胞死亡不提供免費售后服務。
Notice：
      客戶收到細胞有任何疑問請及時致電我們，細胞收到后1周內沒有任何電話，或其他形式回訪，默認為細胞質量沒問題，之后出了任何問題不給予免費售后。細胞免費售后只提供一次，若重發后再次培養死亡不再免費補發，細胞收貨時已經死亡或密度不足的除外。
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